我們知道，在細胞培養(yǎng)檢測實驗在實驗儀器、培養(yǎng)基等等工作上都要耗費不少的人力和體力。好在很久以前就有高人發(fā)明了細胞保存這個實驗步驟，將暫時多出來的細胞冰凍保存，以zui大程度保存細胞活力。
(1)凍存細胞傳統(tǒng)方法:
冷存管置于4℃10分鐘--->-20℃30分鐘--->-80℃16～18小時(或隔夜)--->液氮槽vaporphase長期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止胞內(nèi)冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
(2)程序降溫：
利用已設(shè)定程序的等速降溫機以-1～-3℃/分鐘之速度由室溫降至(-80℃以下)-120℃，再放在液氮槽vaporphase長期儲存。適用于懸浮型細胞與hybridoma之保存。
凍存細胞步驟：
(1)冷凍前24-48小時更換半量或全量培養(yǎng)基，使細胞處于指數(shù)生長期。
(2)配制冷凍保存溶液(使用前配制)：另取一離心管，加入培養(yǎng)基、血清，逐滴加入二甲基亞砜(DMSO)至20%濃度，即制成雙倍的凍存液，置于室溫下待用。
(3)離心收集培養(yǎng)之細胞，用加血清的培養(yǎng)基重懸起細胞，取少量細胞懸浮液(約0.1ml)計數(shù)細胞濃度及凍前存活率。
(4)取與細胞懸液等量的凍存液，緩慢逐滴加入細胞懸液，并晃動試管，制成細胞凍存懸液(DMSOzui后濃度為5～10%)，使細胞濃度為1～5×106cells/ml，混合均勻，分裝于已標示*之冷凍保存管中，1～2ml/vial，并取少量細胞懸浮液作污染檢測。嚴密封口后，注明細胞名稱、代數(shù)、日期。然后進行凍存。
在線咨詢